Koliko košta transformacija ligacije?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Zadnja izmjena: 2023-12-15 23:34

Transformacija . Dodajte između 1-5 µl ligacija smjese nadležnim ćelijama za transformacija . Prošireno ligacija sa PEG uzrokuje pad transformacija efikasnost (Brzo Ligacija Kit). Elektroporacija se preporučuje za velike konstrukcije (>10 000 bp).

U ovom slučaju, koliko mi je proizvoda za ligaciju potrebno za transformaciju?

Transformacija . Dodajte između 1-5 µl ligacija smjese nadležnim ćelijama za transformacija . Prošireno ligacija sa PEG uzrokuje pad transformacija efikasnost (Brzo Ligacija Kit). Elektroporacija se preporučuje za velike konstrukcije (>10 000 bp).

Potom se postavlja pitanje šta je ligacija i transformacija? U tipičnom eksperimentu kloniranja, istraživači prvo ubacuju dio DNK, kao što je gen, u kružni dio DNK koji se zove plazmid. Ovaj korak koristi restrikcijske enzime i DNK ligazu i naziva se a ligacija . Nakon a ligacija , sljedeći korak je prijenos DNK u bakterije u procesu tzv transformacija.

Nakon toga, može se zapitati i koliko je DNK potrebno za ligaciju?

Ukupna koncentracija vektora + insert treba da bude između 1-10 Μg/ml radi efikasnosti ligacija . Vektor: Preporučuju se molarni omjeri umetanja između 1:1 i 1:10 (tipično je 1:3). Ako niste sigurni u svoje DNK koncentracije, izvode više ligacija s različitim omjerima.

Koliko dugo možete čuvati reakciju ligacije?

Ligacije mogu obaviti na sobnoj temperaturi ili hladnijem (mislim na 12-16°C) preko noći ili čak nekoliko dana, ako ti stvarno sam zauzet. Možeš takođe pohraniti ligaciju u frižider i kasnije izvaditi da se ligiranje nastavi na sobnoj temperaturi kao dugo po potrebi.