Koja je svrha prečišćavanja PCR proizvoda?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Zadnja izmjena: 2023-12-15 23:34

Purification DNK iz a PCR reakcija je tipično neophodna za daljnju upotrebu i olakšava uklanjanje enzima, nukleotida, prajmera i komponenti pufera. Tradicionalno se to postizalo korištenjem metoda organske ekstrakcije, kao što je ekstrakcija fenolom hloroformom, nakon čega je slijedilo taloženje etanolom.

Također se postavlja pitanje zašto je potrebno pročišćavati PCR proizvode?

Trebaš da pročistiti PCR proizvode da se riješi neiskorištenih prajmera, nukleotida i enzima kako bi se optimizirao uspjeh ligacije, koja će održavati i sekvencirati proizvod of PCR . To purify the PCR proizvodi , koristi se hromatografija isključivanja veličine.

Dodatno, šta da radim nakon PCR? Da biste maksimizirali oporavak, isperite retentatnu čašicu dva puta sa 10 do 20 µL TE ili vode. Finale PCR reakcija može sadržavati do mikrogram amplificirane DNK koja se može koristiti za razne primjene u molekularnoj biologiji. Ove aplikacije mogu biti manje ili više osjetljive na preostale komponente PCR reakcijska smjesa.

Neko se također može pitati, kako čistite PCR proizvode?

Klasične metode koje se koriste za cisto gore PCR proizvodi prije sekvenciranja uključuju gel elektroforezu, precipitaciju etanolom i kolonsku kromatografiju. Iako su prilično efikasne, ove metode mogu brzo postati glomazne kada se paralelno obrađuje više uzoraka i pokazuju različite stepene gubitka uzorka.

Zašto se DNK mora očistiti?

Mi cisto gore DNK iz vodenih otopina za uklanjanje puferskih soli, enzima ili drugih tvari koje bi mogle utjecati na daljnje primjene. Primjeri uključuju PCR reakciju cisto gore, cisto gore nakon restrikcijskih digestija i cisto od genoma ili plazmida DNK kontaminiran ćelijskim proteinima/otpadima.