Kako se izračunava koncentracija DNK pomoću spektrofotometra?
Kako se izračunava koncentracija DNK pomoću spektrofotometra?

Video: Kako se izračunava koncentracija DNK pomoću spektrofotometra?

Video: Kako se izračunava koncentracija DNK pomoću spektrofotometra?
Video: Dončić onima koji pumpaju cijene: SDP bi na njih porezom na ekstraprofit! 2024, Novembar
Anonim

Koncentracija DNK je procijenjeno po mjerenje apsorbancije na 260nm, podešavanje A260 mjerenje zamućenosti ( mereno po apsorbancija na 320nm), množenje by faktor razblaženja, i koristeći odnos koji je A260 od 1,0 = 50µg/ml čiste dsDNK.

Ljudi također pitaju, kako pronalazite koncentraciju i čistoću DNK?

Za procjenu DNK čistoća , mjeri apsorbanciju od 230 nm do 320 nm kako bi se otkrili drugi mogući zagađivači. Najčešći proračun čistoće je omjer apsorbancije na 260 nm podijeljen s očitavanjem na 280 nm. Dobra kvaliteta DNK imaće A260/A280 odnos 1,7–2,0.

Isto tako, šta je dobra koncentracija DNK? A dobro kvaliteta DNK uzorak treba da ima A260/A280 odnos 1,7-2,0 i A260/A230 omjer veći od 1,5, ali budući da osjetljivost različitih tehnika na ove kontaminante varira, ove vrijednosti treba uzeti samo kao vodič za čistoću vašeg uzorka.

S tim u vezi, kako NanoDrop izračunava koncentraciju DNK?

Pomnožite vrijednost apsorbancije na 260 nm sa fiksnim faktorom (to je 50 za DNK ) i dobijete Koncentracija DNK . Voilá. (U redu, to je tehnički A260 uzorka debljine 10 mm koji je pomnožen sa 50; NanoDrop izražava A260 kao da je uzorak debljine 10 mm, kao u standardnoj kiveti).

Zašto smo morali da koristimo spektrofotometar da kvantifikujemo našu DNK?

A spektrofotometar je može odrediti prosječne koncentracije nukleinskih kiselina DNK ili RNK prisutne u smeši, kao i njihovu čistoću. Koristeći Beer-Lambertov zakon to je moguće je povezati količinu apsorbirane svjetlosti s koncentracijom apsorbirajuće molekule.

Preporučuje se: